流式抗原检测服务

样本说明：

1、灌洗液样本，最好收集细胞沉淀后，用红细胞裂解液孵育1-2分钟后，PBS重悬，再低温离心收集细胞沉淀，预冷的70%乙醇固定，再-20°保存用于流式检测。

2、全血实验 避免使用络合钙的抗凝剂，如ACD与EDTA，因为它们会限制钙依赖性激活过程，推荐用肝素钠。此外LPS，一种常见的生物试剂污染物，是强细胞激活剂，可能会混淆试验结果。血样在8小时内分析，超过8小时会导致活性的损失，一般细胞因子阳性细胞会减少5%。如不能在8小时之内检测，应将真空采血管水平室温放置。

3、组织样本制备 取组织时去除组织内凝固的血块。

4、固定，穿膜的试剂PH一定要正确。

注意事项：

1、选择合适的对照：为保证结合的真实和可靠性，至少荧光设置同型对照：用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色；阴性对照(Isotype Control)：非特异荧光的强弱取决于抗体浓度、单克隆荧光抗体特异性和纯度，应与试验管抗体相对应。在多色分析时，同型对照应与其它抗体同时使用，以避免补偿造成的误差。

2、荧光素的选择：检测相对低表达细胞因子如IL-4时，应选用PE或APC标记；单检测某一细胞因子时最好也选用PE或APC标记；同时检测多种细胞因子时，弱表达的应选用PE或APC，FITC标记最好用于高表达细胞因子如IFN-γ。

3、采用直接与间接免疫荧光混合染色法时，原则上先进行间接标记，再进行直接标记。间接标记为细胞内染色时，应该考虑固定或透膜剂对直接标记抗体与靶目标的亲和力或靶目标的抗原性的变化等影响，若影响大，则应该先标记直接抗体。