shRNA干扰载体构建
载体构建(vectorconstruction),为把DNA分子运送到受体细胞中去,必须寻找一种能进入细胞、在装载了外来的DNA片段后仍能照样复制的运载体。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。载体构建即是构建含外源DNA的质粒。
在活体中输送“小干扰RNA”(siRNA)的一种办法是,将siRNA序列作为“短发夹”克隆进质粒载体中。当送入动物体内时,该发夹序列被表达出来,形成一个“双链RNA”(dsRNA),并被RNAi通道处理。shRNA包括两个短反向重复序列。克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列,中间由一茎环(loop)序列分隔的,组成发夹结构,由polⅢ启动子控制。随后再连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。
在活体中输送“小干扰RNA”(siRNA)的一种办法是,将siRNA序列作为“短发夹”克隆进质粒载体中。当送入动物体内时,该发夹序列被表达出来,形成一个“双链RNA”(dsRNA),并被RNAi通道处理。shRNA包括两个短反向重复序列。克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列,中间由一茎环(loop)序列分隔的,组成发夹结构,由polⅢ启动子控制。随后再连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。
- 质粒类型:
- • shRNA干扰过表达质粒
- (三保一套装:保证其中有一条干扰效率大于70%,否则免费重新合成一套。)
- 表达系统:
- • 哺乳动物表达系统
- • 慢病毒表达系统
- • 昆虫细胞表达系统
- • 酵母细胞表达系统
- • 大肠杆菌表达系统
- 蛋白标签:
- • 荧光标签 eGFP, eYFP, eCFP, mCherry
• 多功能标签 HaloTag®, AviTag™
• 促溶解度和纯化标签 His, SUMO, GST, MBP, Flag, 3xFlag
• 抗体免疫共沉淀标签 HA, cMyc - • 有效片段合成
- • 亚克隆
- • 质粒扩增
- • 1-2周交付
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• 目的基因ID(CDS序列NM_XXXXX.X)或目的基因信息
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• 载体骨架要求(表达系统类型,蛋白标签类型,筛选标记类型,启动子类型等)
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• 质粒/甘油菌
• 质粒说明书
• QPCR检测
• 慢病毒包装服务
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