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fibroblast成纤维细胞

成纤维细胞(fibroblast)是 疏松结缔组织的主要细胞成分,由 胚胎时期的 间充质细胞(mesenchymal cell)分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的 纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。 根据不同功能活动状态,可将细胞划分成成纤维细胞和 纤维细胞,成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。 2013年12月,英国伦敦国王学院研究人员发现成纤维细胞具有不同类型,它们的独特性能可帮助修复受损皮肤,并降低年龄老化对皮肤的影响。

原代真皮成纤维细胞;正常、人类、成人 (HDFa) 是一种皮肤细胞系,在应对病原体、皮肤老化、伤口愈合、基因传递和皮肤病(包括硬皮病)方面具有研究应用。当在补充有成纤维细胞生长试剂盒成分的成纤维细胞基础培养基中生长时,它提供了一个理想的细胞系统,在无血清或低血清条件下繁殖真皮成纤维细胞。

细胞复苏:

注意:

1、低温保存的细胞非常脆弱,请将冻存管放入37°的水浴中解冻,尽快复苏细胞。

2、提前室温预热培养基。

3、在无菌区准备好T-25培养瓶加入约5ml培养基。

4、将冻存管放入37°水浴中解冻,握住冻存管晃动,直到内容物完全融化。立即将冻存管从水浴中取出,擦干并喷洒75%乙醇,移至无菌区。

5、小心地拆卸盖子,不要触碰到里面的螺纹,用移液枪轻轻吸出细胞,加入到准备好的培养瓶中。

6、轻轻摇动培养瓶使细胞均匀分布。如有必要,松开阀盖,以便气体交换。

7、将培养瓶放入CO2培养箱中培养。

8、过夜后,观察细胞形态并更换培养基。

 

传代:收到细胞后,请对细胞培养瓶外表进行消毒,将细胞置于培养箱中进行1-2小时的缓冲,待细胞恢复基本生长状态后,进行后续细胞实验。

在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:

1、细胞未长至85%时,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,若培养瓶上无特殊标注,吸去剩余培养液,只留6-8ml培养液继续培养。

2.、细胞已长满(达85-95%)。即可进行传代,具体步骤如下:

①弃去培养液,用PBS洗涤1-2次;

②加入1.0ml胰酶消化液,37°消化约3min,显微镜下观察细胞消化情况,若细胞回缩变圆、透亮、轻拍瓶壁呈流沙样脱落,则迅速拿回操作台,加入至少双倍的完全培养液,终止消化并轻轻吹打细胞1-2次,使其变成单细胞悬液;

③将细胞收集于离心管中离心1000rpm/5min,弃上清,轻弹管底,将细胞弹散;

④加入新鲜培养基重悬细胞,进行传代;

⑤如果没有特别说明,建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2。

注: 1、观察细密度最好用(4X物镜)低倍镜观察,以便正确的判断细密度;观察细胞状态请用(10X或20X)高倍镜观察;

2、推荐使用0.25%胰酶EDTA消化液;

3、瓶中运输的培养液不能重复使用,请换新鲜培养液培养;

4、此细贴壁不牢,移动或操作时应小心,如发现细胞有脱落,可离心重悬后接种到新瓶内。

 

保存:冻存条件: 70%基础培养液+20%胎牛血清+10%DMSO

保存条件:液氮存储

 

常见问题以及解决方案:

1、在收到细胞后先观察培养瓶是否破裂,漏液等,如遇到上述问题请及时拍照并与我们联系。

2、贴壁细胞:培养瓶不开封,显微镜下检查细胞状态,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余少里漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度到达85%左右,进行消化传代;如细胞仍不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,注意观察。如细胞仍不能贴壁,请用台盼蓝染色鉴定细胞活力,并请及时拍照(多倍数多视野), 包括染色照片,并联系我们。(以上仅为贴壁细胞处理方法)

3、悬浮细胞:培养瓶不开封,显微镜下检查细胞状态,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,将整瓶细胞及培养液分批离心(1000rpm/5mim),加入适量培养基,根据离心后的细胞量进行放回培养或分瓶培养。( 以上仅为悬浮细胞处理方法)

4、半悬细胞:培养瓶不开封,显微镜下检查细胞状态,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察,将整瓶细胞培养液上层悬浮细胞离心(1000rpm/5mim),重悬细胞后加入原培养瓶培养至传代。细胞数里较大,可将贴壁细胞消化下来,与上层悬浮细胞混匀传代。重悬上层悬浮细胞时必须保持下层贴壁细胞的营养条件,防止贴壁细胞缺乏营养。(以上仅为半悬细胞处理方法)