HL-60人原髓细胞白血病细胞

 HL-60人原髓细胞白血病细胞

细胞名称：HL-60人原髓细胞白血病细胞

种属：人

组织来源：外周血

形态：淋巴母细胞样

培养特性：悬浮细胞

注意事项：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护。

培养条件：温度：37°C，气相：95%空气，5%二氧化碳。

细胞复苏：

注意：

1、低温保存的细胞非常脆弱，请将冻存管放入37°的水浴中解冻，尽快复苏细胞。

2、提前室温预热培养基。

3、在无菌区准备好T-25培养瓶加入约5ml培养基。

4、将冻存管放入37°水浴中解冻，握住冻存管晃动，直到内容物完全融化。立即将冻存管从水浴中取出，擦干并喷洒75%乙醇，移至无菌区。

5、小心地拆卸盖子，不要触碰到里面的螺纹，用移液枪轻轻吸出细胞，加入到准备好的培养瓶中。

6、轻轻摇动培养瓶使细胞均匀分布。如有必要，松开阀盖，以便气体交换。

7、将培养瓶放入CO2培养箱中培养。

8、过夜后，观察细胞形态并更换培养基。

传代：收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行1-2小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。

在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

1、细胞未长至85%时，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留6-8ml培养液继续培养。

2、细胞已长满（达85-95%）。即可进行传代，具体步骤如下：

①弃去培养液，用PBS洗涤1-2次；

②加入1.0ml胰酶消化液，37°消化约3min，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍瓶壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入至少双倍的完全培养液，终止消化并轻轻吹打细胞1-2次，使其变成单细胞悬液；

③将细胞收集于离心管中离心1000rpm/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散;

④加入新鲜培养基重悬细胞，进行传代;

⑤如果没有特别说明，建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2。

注: 1、观察细密度最好用(4X物镜)低倍镜观察，以便正确的判断细密度;观察细胞状态请用(10X或20X)高倍镜观察;

2、推荐使用0.25%胰酶EDTA消化液;

3、瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养;

4、此细贴壁不牢，移动或操作时应小心，如发现细胞有脱落,可离心重悬后接种到新瓶内。

保存：冻存条件: 70%基础培养液+20%胎牛血清+10%DMSO

保存条件：液氮存储

常见问题以及解决方案：

1、在收到细胞后先观察培养瓶是否破裂，漏液等，如遇到上述问题请及时拍照并与我们联系。

2、贴壁细胞：培养瓶不开封，显微镜下检查细胞状态，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常,剩余少里漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度到达85%左右，进行消化传代；如细胞仍不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养，注意观察。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色鉴定细胞活力，并请及时拍照(多倍数多视野)， 包括染色照片，并联系我们。(以上仅为贴壁细胞处理方法)

3、悬浮细胞：培养瓶不开封，显微镜下检查细胞状态，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，将整瓶细胞及培养液分批离心(1000rpm/5mim)，加入适量培养基，根据离心后的细胞量进行放回培养或分瓶培养。( 以上仅为悬浮细胞处理方法)

4、半悬细胞：培养瓶不开封，显微镜下检查细胞状态，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察，将整瓶细胞培养液上层悬浮细胞离心(1000rpm/5mim)，重悬细胞后加入原培养瓶培养至传代。细胞数里较大，可将贴壁细胞消化下来，与上层悬浮细胞混匀传代。重悬上层悬浮细胞时必须保持下层贴壁细胞的营养条件，防止贴壁细胞缺乏营养。(以上仅为半悬细胞处理方法)