HacaT（人永生化角质形成细胞）

细胞培养条件

细胞名称：HacaT

培养条件：DMEM+10%FBS

传代方法：建议第一代1:2传代

传代条件：2天换液

生长特性：贴壁生长

冻存条件：建议：细胞冻存液、-80℃保存一个月/-196℃保存5年

细胞培养建议

1、细胞复苏

将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5ml培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心3min，弃去上清液，补加4-6ml完全培养基吹匀。然后将细胞悬液加入培养瓶中过夜，第二天检查细胞密度并换液。

2、细胞传代

当细胞密度达到80%-90%，即可进行传代培养。

弃去培养液上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞2次。

加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-EDTA）BC-CE-005于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化3-5min，镜下观察细胞大部分圆缩并脱落，肉眼观察细胞培养瓶上部细胞呈挂线状滑落，迅速拿回操作台，于手心轻敲几下培养瓶，可见细胞呈沙粒状滑落，加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

轻轻吹打细胞，完全脱落分散后吸出，在1000RPM条件下离心3min，弃去上清液，补加1-2ml吹匀

按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞重悬按1：2到1：3的比例分到新的培养瓶中。