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NCTC clone 929 -L cell, L-929- (小鼠成纤维细胞)

NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]细胞是1948年3月建立的细胞系L的克隆株;细胞系L是最早建立的连续培养细胞系之一,而NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]是最早的克隆株。从一只100日龄的雄性C3H/An小鼠的皮下疏松结缔组织入脂肪组织中建立了亲本细胞系L,第95代的细胞系L使用毛细管法分离单细胞建立了NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]。

NCTC clone 929小鼠成纤维细胞

 

细胞名称:NCTC clone 929 [L cell, L-929] (小鼠成纤维细胞) 

 

种属:小鼠

 

组织来源:皮下结缔组织;疏松结缔组织及脂肪

 

形态:成纤维细胞样

 

培养特性:贴壁细胞

 

注意事项:所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护。

培养条件:温度:37°C,气相:95%空气,5%二氧化碳。

 

细胞复苏:

注意:

1、低温保存的细胞非常脆弱,请将冻存管放入37°的水浴中解冻,尽快复苏细胞。

2、提前室温预热培养基。

3、在无菌区准备好T-25培养瓶加入约5ml培养基。

4、将冻存管放入37°水浴中解冻,握住冻存管晃动,直到内容物完全融化。立即将冻存管从水浴中取出,擦干并喷洒75%乙醇,移至无菌区。

5、小心地拆卸盖子,不要触碰到里面的螺纹,用移液枪轻轻吸出细胞,加入到准备好的培养瓶中。

6、轻轻摇动培养瓶使细胞均匀分布。如有必要,松开阀盖,以便气体交换。

7、将培养瓶放入CO2培养箱中培养。

8、过夜后,观察细胞形态并更换培养基。

 

传代:收到细胞后,请对细胞培养瓶外表进行消毒,将细胞置于培养箱中进行1-2小时的缓冲,待细胞恢复基本生长状态后,进行后续细胞实验。

在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:

1、细胞未长至85%时,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,若培养瓶上无特殊标注,吸去剩余培养液,只留6-8ml培养液继续培养。

2、细胞已长满(达85-95%)。即可进行传代,具体步骤如下:

弃去培养液,用PBS洗涤1-2次;

加入1.0ml胰酶消化液,37°消化约3min,显微镜下观察细胞消化情况,若细胞回缩变圆、透亮、轻拍瓶壁呈流沙样脱落,则迅速拿回操作台,加入至少双倍的完全培养液,终止消化并轻轻吹打细胞1-2次,使其变成单细胞悬液;

将细胞收集于离心管中离心1000rpm/5min,弃上清,轻弹管底,将细胞弹散;

加入新鲜培养基重悬细胞,进行传代;

如果没有特别说明,建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2。

注: 1、观察细密度最好用(4X物镜)低倍镜观察,以便正确的判断细密度;观察细胞状态请用(10X或20X)高倍镜观察;

2、推荐使用0.25%胰酶EDTA消化液;

3、瓶中运输的培养液不能重复使用,请换新鲜培养液培养;

4、此细贴壁不牢,移动或操作时应小心,如发现细胞有脱落,可离心重悬后接种到新瓶内。

 

保存:冻存条件: 70%基础培养液+20%胎牛血清+10%DMSO

保存条件:液氮存储

 

常见问题以及解决方案:

1、在收到细胞后先观察培养瓶是否破裂,漏液等,如遇到上述问题请及时拍照并与我们联系。

2、贴壁细胞:培养瓶不开封,显微镜下检查细胞状态,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余少里漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度到达85%左右,进行消化传代;如细胞仍不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,注意观察。如细胞仍不能贴壁,请用台盼蓝染色鉴定细胞活力,并请及时拍照(多倍数多视野), 包括染色照片,并联系我们。(以上仅为贴壁细胞处理方法)

3、悬浮细胞:培养瓶不开封,显微镜下检查细胞状态,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,将整瓶细胞及培养液分批离心(1000rpm/5mim),加入适量培养基,根据离心后的细胞量进行放回培养或分瓶培养。( 以上仅为悬浮细胞处理方法)

4、半悬细胞:培养瓶不开封,显微镜下检查细胞状态,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察,将整瓶细胞培养液上层悬浮细胞离心(1000rpm/5mim),重悬细胞后加入原培养瓶培养至传代。细胞数里较大,可将贴壁细胞消化下来,与上层悬浮细胞混匀传代。重悬上层悬浮细胞时必须保持下层贴壁细胞的营养条件,防止贴壁细胞缺乏营养。(以上仅为半悬细胞处理方法)